【總RNA提取】
【出現(xiàn)工作臺界面】
【左側(cè)】：電動勻漿機(jī)*、臺式離心機(jī)、盛有冰的容器（不帶蓋）、玻璃平皿**、微量取液器、盛有消毒槍頭的塑料盒、EP管、1ml勻漿瓶、無菌手術(shù)刀*、無菌手術(shù)鑷*、計(jì)時器
（*鼠標(biāo)箭頭放上：說明框顯示：“DEPC水處理過”，3秒鐘后消失；
**鼠標(biāo)箭頭放上：說明框顯示：“所有玻璃器皿先用酸處理，沖洗干凈，高壓消毒”，3秒鐘后消失）
【右側(cè)】：待提取組織（肝臟）、DEPC水*、異丙醇、氯仿、75%冰乙醇
(*鼠標(biāo)箭頭放上：一秒鐘后“實(shí)驗(yàn)注意”顯示：1%焦碳酸二乙酯：去除外源性RNA酶)
【畫面中央】：工作臺：一塊象征性的平臺，有“工作臺”字樣
（鼠標(biāo)箭頭放上：一秒鐘后“實(shí)驗(yàn)注意”顯示：DEPC水處理過）
【畫面右下角】：垃圾桶（有骷髏頭圖形標(biāo)記）
【界面按鈕設(shè)計(jì)】：實(shí)驗(yàn)注意：有內(nèi)容時自動顯示
實(shí)驗(yàn)提示：步箭頭放上自動顯示，以后每一步均自動顯示
重新操作：返回到上一步結(jié)束
退出實(shí)驗(yàn)：回到本步驟界面
退出運(yùn)行：回到首頁
關(guān)閉音樂：實(shí)驗(yàn)開始，背景音樂自動響起。按此鍵，即關(guān)閉音樂
【操作開始】
1、工作臺中央的盛冰的容器---容器中放有和容器口齊平的碎冰。
實(shí)驗(yàn)提示：按順序選擇玻璃平皿、肝臟組織、手術(shù)刀，切碎標(biāo)本。
2、切碎標(biāo)本 ------ 選擇玻璃平皿放置于盛冰容器中央，拖動肝臟組織放置于玻璃平皿中（鼠標(biāo)箭頭放置于肝臟上時，說明框顯示：0.1g小鼠肝臟，3秒鐘后隱去）。點(diǎn)擊無菌手術(shù)刀，拖動手術(shù)刀至肝臟組織上（該動作完成后，自動出現(xiàn)說明框：切碎肝臟組織，同時手術(shù)刀上下做切碎動作，三秒鐘后動作停止，手術(shù)刀回到原位）。
實(shí)驗(yàn)提示：使用無菌鑷子，將肝臟組織放入1ml勻漿瓶內(nèi)。
3、移動1ml 勻漿瓶----點(diǎn)擊勻漿瓶，并拖動至工作臺中央的冰盒內(nèi)；點(diǎn)擊無菌鑷子，鼠標(biāo)變?yōu)殍囎有螤?，將玻璃平皿上的切碎組織夾入勻漿瓶內(nèi)（該動作完成后，玻璃平皿及無菌鑷子回到工作臺界面原位）
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊微量吸液器，點(diǎn)擊裝有槍頭的塑料盒，盒打開。微量吸液器裝上槍頭，拖動微量吸液器至Trizol處，吸取Trizol，加入EP管。
4、加入Trizol---- 1 點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取1ml液體”，3秒鐘后隱去）；2 點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“1ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上（槍頭為藍(lán)色）；3點(diǎn)擊微量吸液器，拖動至Trizol處，點(diǎn)擊Trizol（槍頭內(nèi)顯示吸取1ml紅色液體）；4拖動微量吸液器至勻漿瓶處，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)槍頭內(nèi)液體注入EP管內(nèi)的畫面），液體注入后，微量吸液器回到吸液架上。
實(shí)驗(yàn)提示：選擇勻漿機(jī)；拖動勻漿瓶至勻漿機(jī)；點(diǎn)擊勻漿機(jī)，勻漿兩次，至勻漿瓶內(nèi)液體變?yōu)榫灰后w。
5、勻漿----
① 動畫顯示逆時針擰松電機(jī)套下端連接螺紋（不用全部擰下），插入1ml勻漿杵子后順時針擰緊（如插入較緊時可邊插邊用手往上擰）。文本框顯示“擰松電機(jī)套下端連接螺紋（不用全部擰下），插入1ml勻漿杵子后擰緊（如插入較緊時可邊插邊用手往上擰）”
② 將1ml勻漿瓶夾在試管夾上，對好中心，握住手柄上下試動，至完全對直，再把瓶子夾緊（動畫顯示紅色手柄下拉，勻漿杵子伸入勻漿瓶內(nèi)，瓶子夾緊后自動恢復(fù)）
③ 點(diǎn)擊冰盒，拖動到勻漿瓶底部，打開冰盒蓋，使勻漿瓶底部接觸冰。（文本框顯示“加冰浴防止溫度升高使組織失活”） 冰盒 開蓋后里面的冰
④ 打開電源開關(guān)，把調(diào)速調(diào)至最小，右手把握控制手柄，
運(yùn)動杵子至瓶口配合處，調(diào)節(jié)調(diào)速旋扭至所要的速度。即開始勻漿，控制手柄向下運(yùn)動至瓶底部（不能太用力），再往上運(yùn)動至與瓶配合處，往復(fù)運(yùn)動至成紅色均一液體。
⑤ 勻漿機(jī)回到原位置，勻漿瓶仍位于冰盒中，將勻漿瓶內(nèi)液體倒入1.5ml離心管內(nèi)，離心管置于冰盒內(nèi)，勻漿瓶自動消失。
文本框顯示：
“實(shí)驗(yàn)注意：1、電動玻璃勻漿機(jī)嚴(yán)禁在勻漿杵子未放入勻漿器內(nèi)時懸轉(zhuǎn)，及無放入組織、液體等空瓶研磨。
2、 如使用中由于負(fù)載過大（往往運(yùn)動過快）發(fā)生卡住時，手柄應(yīng)速向上運(yùn)動但勻漿杵子不脫離液面。
3、 勻漿要徹底，如一次勻漿不徹底，需再進(jìn)行一次”
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊EP管，拖出冰盒，點(diǎn)擊計(jì)時器，室溫下靜置5分鐘。
實(shí)驗(yàn)提示：靜置使細(xì)胞充分裂解，核蛋白中核酸與蛋白解離。
6、靜置---- 1點(diǎn)擊EP管，拖動EP管至冰盒外，冰盒回到原位；2點(diǎn)擊計(jì)時器，拖動計(jì)時器至操作臺中央；3再次點(diǎn)擊計(jì)時器，開始計(jì)時（音樂出現(xiàn)倒計(jì)時聲音，說明框顯示“室溫靜置5分鐘”，持續(xù)時間3秒鐘后隱去），說明框隱去后倒計(jì)時聲音停止，計(jì)時器退回原位置,冰盒移動至操作臺中央，EP管自動至冰盒內(nèi)。
實(shí)驗(yàn)提示: 點(diǎn)擊微量吸液器，加入槍頭，吸取0.2ml氯仿。
7、加入氯仿----點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取0.2ml液體”，3秒鐘后隱去）；2 點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“0.2ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點(diǎn)擊微量吸液器，拖動至氯仿處，點(diǎn)擊氯仿（槍頭內(nèi)顯示吸取0.2ml液體；實(shí)驗(yàn)注意：必需按總體積的1/5加入）；4拖動微量吸液器至EP管處，EP管蓋子打開，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)槍頭內(nèi)液體注入EP管內(nèi)的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到吸液架上。
實(shí)驗(yàn)注意：氯仿的作用：1、促進(jìn)有機(jī)相和水相的分離；2、去除上清中痕量的酚。
實(shí)驗(yàn)提示：劇烈振蕩
8、振蕩---- 1點(diǎn)擊EP管（說明框內(nèi)顯示：劇烈震蕩15s。EP管上下顛倒混勻振蕩，3秒鐘后停止，重新位于冰盒內(nèi)）
實(shí)驗(yàn)提示：靜置10分鐘
9、靜置---- 1點(diǎn)擊計(jì)時器，拖動計(jì)時器至操作臺中央；3再次點(diǎn)擊計(jì)時器，開始計(jì)時（音樂出現(xiàn)倒計(jì)時聲音，說明框顯示“靜置10分鐘”，持續(xù)時間5秒鐘后隱去），說明框隱去后倒計(jì)時聲音停止，計(jì)時器退回原位置。
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊離心機(jī)，配平，開始離心
10、離心---- 1點(diǎn)擊離心機(jī)，拖動離心機(jī)至操作臺中央，離心機(jī)蓋子自動打開，其內(nèi)可見已放置一配平管（說明框顯示“配平管”，持續(xù)3秒鐘后隱去）；2拖動EP管至配平管對面（其余孔不能放進(jìn)，放置正確后，離心機(jī)蓋子自動關(guān)閉）；3提示框出現(xiàn)：“選擇溫度______℃”，“選擇轉(zhuǎn)速--______g”，“選擇時間______min”，實(shí)驗(yàn)提示分別顯示“4℃、12000g、15min”，若提示框內(nèi)填寫正確，提示框自動消失；若任何一項(xiàng)填寫錯誤，提示框持續(xù)存在；4點(diǎn)擊離心機(jī)，開始離心，畫面停頓5秒鐘后，離心機(jī)蓋子自動打開（說明框顯示“離心結(jié)束”），EP管自動出現(xiàn)在操作臺中央（EP管內(nèi)液體分為3層：上層無色透明液體，約0.5ml，鼠標(biāo)置于該液體層，說明框內(nèi)顯示：“水相”，約3秒鐘后說明框隱去；中間白色不透明液體，約0.1ml，鼠標(biāo)置于該液體層，說明框內(nèi)顯示：“蛋白變性層”，約3秒鐘后說明框隱去；下層為紅色不透明液體，約0.6ml，鼠標(biāo)置于該液體層，說明框內(nèi)顯示：“有機(jī)相”，約3秒鐘后說明框隱去；），離心機(jī)蓋子蓋上，回到原位。
實(shí)驗(yàn)提示：選擇新的EP管，點(diǎn)擊微量吸液器，裝好槍頭，轉(zhuǎn)移水相液體至新的EP管內(nèi)。
11、轉(zhuǎn)移---- 1點(diǎn)擊操作臺左側(cè)另外一只新EP管，并拖動至操作臺中央，EP管蓋子自動打開；2點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取水相液體”，3秒鐘后隱去）；3點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“0.5ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；拖動微量吸液器至原EP管旁，原EP管蓋子自動打開；4微量吸液器伸入原EP管水相液體底層（實(shí)驗(yàn)注意提示：“不要碰到蛋白變性層”，），點(diǎn)擊微量吸液器吸取0.5ml液體，拖動微量吸液器至新EP管內(nèi)，再次點(diǎn)擊微量吸液器，槍頭內(nèi)液體注入新EP管內(nèi)；5重復(fù)步驟4。6原EP管蓋子自動蓋上，自動轉(zhuǎn)移至垃圾桶內(nèi)；微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到原位置；新EP管位于操作臺中央。
實(shí)驗(yàn)提示：用微量吸液器加入等體積異丙醇。
12、加入異丙醇-----1點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取0.5ml液體”，3秒鐘后隱去）；2 點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“0.5ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點(diǎn)擊微量吸液器，拖動至異丙醇處，點(diǎn)擊異丙醇（槍頭內(nèi)顯示吸取0.5ml無色透明液體；實(shí)驗(yàn)注意：加入等體積異丙醇）；4拖動微量吸液器至EP管處，EP管蓋子打開，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)槍頭內(nèi)液體注入EP管內(nèi)的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。
實(shí)驗(yàn)注意：異丙醇的作用：沉淀RNA
實(shí)驗(yàn)提示：溫和顛倒混勻
13、混勻---- 1點(diǎn)擊EP管（說明框內(nèi)顯示：溫和顛倒混勻。3秒鐘后停止）
實(shí)驗(yàn)提示：室溫靜置10分鐘
14、靜置---- 1點(diǎn)擊計(jì)時器，拖動計(jì)時器至操作臺中央；3再次點(diǎn)擊計(jì)時器，開始計(jì)時（音樂出現(xiàn)倒計(jì)時聲音，說明框顯示“室溫靜置10分鐘”，持續(xù)時間5秒鐘后隱去），說明框隱去后倒計(jì)時聲音停止，計(jì)時器退回原位置, EP管位于操作臺中央。
實(shí)驗(yàn)提示：離心10分鐘
15、離心---- 1點(diǎn)擊離心機(jī)，拖動離心機(jī)至操作臺中央，離心機(jī)蓋子自動打開，其內(nèi)可見已放置一配平管（說明框顯示“配平管”，持續(xù)3秒鐘后隱去）；2拖動EP管至配平管對面（其余孔不能放進(jìn)，放置正確后，離心機(jī)蓋子自動關(guān)閉）；3提示框出現(xiàn)：“選擇溫度______℃”，“選擇轉(zhuǎn)速--______g”，“選擇時間______min”，實(shí)驗(yàn)提示分別顯示“4℃、12000g、10min”，若提示框內(nèi)填寫正確，提示框自動消失；若任何一項(xiàng)填寫錯誤，提示框持續(xù)存在；4點(diǎn)擊離心機(jī)，開始離心，畫面停頓3秒鐘后，離心機(jī)蓋子自動打開（說明框顯示“離心結(jié)束”），EP管自動出現(xiàn)在操作臺中央（EP管內(nèi)液體為無色透明液體，EP管底部可見一小塊白色固體物質(zhì)），離心機(jī)蓋子蓋上，回到原位。
實(shí)驗(yàn)提示：棄去上清
16、棄上清----- 1 點(diǎn)擊EP管，EP管蓋子打開，同時鼠標(biāo)變?yōu)榇饕淮涡允痔椎氖值男螤睿?手抓住EP管，EP管自動緩慢傾斜，將其內(nèi)液體倒入垃圾桶內(nèi)（音樂出現(xiàn)倒水的聲音，過程持續(xù)3秒鐘）；3EP管復(fù)位，內(nèi)無液體，底部仍可見白色固體物質(zhì)，EP管蓋子保持打開。
實(shí)驗(yàn)提示：加入1ml冰乙醇
17、加入冰乙醇 ---- 1點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取1ml液體”，3秒鐘后隱去）；2 點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“1ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點(diǎn)擊微量吸液器，拖動至冰乙醇處，點(diǎn)擊異丙醇（槍頭內(nèi)顯示吸取1ml無色透明液體；說明框顯示：乙醇已預(yù)冷）；4拖動微量吸液器至EP管處，EP管蓋子打開，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)槍頭內(nèi)液體注入EP管內(nèi)的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到吸液器架上。
實(shí)驗(yàn)注意：冰乙醇的作用：脫水、除鹽。
實(shí)驗(yàn)提示：離心
18、離心---- 1點(diǎn)擊離心機(jī)，拖動離心機(jī)至操作臺中央，離心機(jī)蓋子自動打開，其內(nèi)可見已放置一配平管（說明框顯示“配平管”，持續(xù)3秒鐘后隱去）；2拖動EP管至配平管對面（其余孔不能放進(jìn)，放置正確后，離心機(jī)蓋子自動關(guān)閉）；3提示框出現(xiàn)：“選擇溫度______℃”，“選擇轉(zhuǎn)速--______g”，“選擇時間______min”，實(shí)驗(yàn)提示分別顯示“4℃、7500g、5min”，若提示框內(nèi)填寫正確，提示框自動消失；若任何一項(xiàng)填寫錯誤，提示框持續(xù)存在；4點(diǎn)擊離心機(jī)，開始離心，畫面停頓3秒鐘后，離心機(jī)蓋子自動打開（說明框顯示“離心結(jié)束”），EP管自動出現(xiàn)在操作臺中央（EP管內(nèi)液體為無色透明液體，EP管底部可見一小塊白色固體物質(zhì)），離心機(jī)蓋子蓋上，回到原位。
實(shí)驗(yàn)提示：棄上清
19、棄上清--- 同步驟16
實(shí)驗(yàn)提示：空氣干燥5-10分鐘
20、空氣干燥---- 1 畫面停頓5s鐘，說明框顯示“空氣干燥10min”。
實(shí)驗(yàn)注意：空氣干燥的作用，使乙醇揮發(fā)。
實(shí)驗(yàn)提示：加入DEPC水，溶解。
21、加入DEPC水---- 1點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取50ul液體”，3秒鐘后隱去）；2 點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“0.1ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點(diǎn)擊微量吸液器，拖動至DEPC水處，點(diǎn)擊（槍頭內(nèi)顯示吸取無色透明液體；說明框顯示：1%DEPC水）；4拖動微量吸液器至EP管處，EP管蓋子打開，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)槍頭內(nèi)液體注入EP管內(nèi)的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，EP管底部白色物質(zhì)逐漸消失，變?yōu)闊o色透明液體；微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。
實(shí)驗(yàn)注意：怎么還不溶？55-60℃水浴可助溶，但時間需控制在10分鐘以內(nèi)。
實(shí)驗(yàn)注意：提取的總RNA置于4℃或冰浴中，立即用于下游實(shí)驗(yàn)，或立即置于-80℃冰箱保存。但無論采用何種方法提取和保存的RNA，都往往會被很快降解，因而建議避免提取RNA后保存。
【對提取的總RNA進(jìn)行分析】
【出現(xiàn)工作臺界面】
【左側(cè)】：電泳槽、電泳儀、紫外燈、電子天平（內(nèi)有稱量紙一張）、微波爐、小藥勺、微量取液器、盛有消毒槍頭的塑料盒、置冰盒中EP管（2只，其中一只內(nèi)含有少量無色透明液體，鼠標(biāo)箭頭放上，說明框顯示：“已提取的總RNA”）、塑料薄膜、三角燒瓶、50ml量筒
【右側(cè)】：瓊脂糖（白色粉末）、加樣緩沖液（藍(lán)色）、溴乙錠*（桔紅色）
實(shí)驗(yàn)注意：溴乙錠【Ethidium Bromide，EB】：是一種高度靈敏的熒光染色劑，用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。EB是強(qiáng)的變性劑，具有致癌性，操作時必須戴手套?。?！ 由于EP具有毒性，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)對含有EB的溶液進(jìn)行凈化處理?。。。。∧阒朗裁唇袃艋幚韱?
【畫面中央】：工作臺：一塊象征性的平臺，有“工作臺”字樣
【畫面右下角】：垃圾桶（有骷髏頭圖形標(biāo)記）
【界面按鈕設(shè)計(jì)】：實(shí)驗(yàn)注意：有內(nèi)容時自動顯示
實(shí)驗(yàn)提示：步箭頭放上自動顯示，以后每一步均自動顯示
重新操作：返回到上一步結(jié)束
退出實(shí)驗(yàn)：回到本步驟界面
退出運(yùn)行：回到首頁
關(guān)閉音樂：實(shí)驗(yàn)開始，背景音樂自動響起。按此鍵，即關(guān)閉音樂
【操作開始】
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊電子天平，點(diǎn)擊藥勺，稱取瓊脂糖0.25g。
1、 稱取瓊脂糖 ----- 1點(diǎn)擊電子天平，拖動至操作臺中央，電子天平拉門自動打開，可見托盤上已有濾紙一張；2點(diǎn)擊藥勺，并拖動至瓊脂糖處；3點(diǎn)擊藥勺（動畫演示藥勺挖取瓊脂糖若干），并拖動至電子天平內(nèi)（動畫演示藥勺傾斜，瓊脂糖落入天平內(nèi)稱量紙上），藥勺回原位，電子天平門關(guān)上，說明框顯示：“0.3g瓊脂糖”，3秒鐘后濾紙連同瓊脂糖自動位于操作臺桌面上，電子天平回到原位。
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊量筒，量取1×TAE電泳緩沖液25ml。
2、 量取電泳緩沖液----- 1點(diǎn)擊量筒，拖動至操作臺中央；2點(diǎn)擊裝有電泳緩沖液的試劑瓶，試劑瓶蓋子自動打開，鼠標(biāo)變?yōu)槭值男螤睿苿印笆帧?，抓住試劑瓶，將其?nèi)的液體傾倒入量筒內(nèi)（音樂出現(xiàn)倒水的聲音，說明框顯示“量取25ml液體”，3秒鐘后試劑瓶回到原位，蓋子蓋上，量筒內(nèi)顯示25ml液體，鼠標(biāo)變?yōu)檎Ｐ螤睿?/div>
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊三角燒瓶，將瓊脂糖及量好的電泳緩沖液倒入燒瓶內(nèi)，并使用微量吸液器，加入1.25ulEB（溴乙錠），于微波爐內(nèi)加熱，溶解瓊脂糖。
3、 溶解瓊脂糖----- 1點(diǎn)擊三角燒瓶，并拖動至操作臺中央；2點(diǎn)擊放有瓊脂糖的濾紙，鼠標(biāo)變?yōu)槭值男螤睿プ…傊菫V紙，將瓊脂糖倒入三角燒瓶內(nèi)；3“手”抓住量筒，將量筒內(nèi)液體倒入三角燒瓶（音樂出現(xiàn)倒水的聲音），3秒鐘后液體倒完，鼠標(biāo)變回原來的形狀，量筒回到原位置，濾紙回到垃圾桶內(nèi)；4點(diǎn)擊微波爐，并拖動至桌面中央，微波爐蓋子打開； 5點(diǎn)擊三角燒瓶，鼠標(biāo)變?yōu)槭值哪樱プ∪菬?，移動至微波爐內(nèi)，三角燒瓶口自動出現(xiàn)一蓋子，微波爐蓋子關(guān)閉； 6點(diǎn)擊微波爐，說明框顯示“溶解瓊脂糖”，瓊脂糖顆粒逐漸溶解，變?yōu)闊o色透明液體，持續(xù)約30秒鐘，微波爐蓋子打開。實(shí)驗(yàn)注意：小心！不要使瓊脂糖滿溢至燒瓶外！ 7點(diǎn)擊微波爐內(nèi)的三角燒瓶，鼠標(biāo)變?yōu)橐恢话咨ぷ魇痔谞?，自動拿起三角燒瓶，放置于操作臺桌面上，畫面停頓3秒鐘（說明框顯示：冷卻至大約60℃，不要冷卻時間過長，避免瓊脂糖凝固）；8點(diǎn)擊微量吸液器，并拖動至操作臺中央，點(diǎn)擊微量吸液器槍頭，槍頭裝至微量吸液器上；拖動微量吸液器至溴已錠處，說明框顯示“有毒，小心操作，并出現(xiàn)一骷髏頭畫面”，3秒鐘后消失；9點(diǎn)擊微量吸液器，動畫顯示淡紅色液體吸入槍頭的畫面，說明框顯示“吸取1.25ul溴已錠”，3秒鐘后消失；10拖動微量移液器至三角燒瓶內(nèi)，燒瓶蓋子自動至垃圾桶，畫面顯示液體注入到瓶內(nèi)的畫面，槍頭自動到垃圾桶，微量吸液器回到移液架。
實(shí)驗(yàn)提示：將加樣梳放置于膠板上，將溶解后的瓊脂糖倒入膠板內(nèi)，待瓊脂糖凝膠凝固后拔出點(diǎn)樣梳。
實(shí)驗(yàn)注意：凝膠顆粒必須完全溶解【圖示瓊脂糖完全溶解和部分溶解對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的圖】
4、 澆板----- 1點(diǎn)擊膠板，并拖動至操作臺中央；2點(diǎn)擊點(diǎn)樣梳，點(diǎn)樣梳自動架至膠板一端，說明框顯示“齒梳的底部離膠板平面的距離為0.5-1mm”；3點(diǎn)擊三角燒瓶，鼠標(biāo)變?yōu)榇魇痔资值男螤?，抓住三角瓶，三角燒瓶緩慢傾倒，液體注入膠板內(nèi)，膠板內(nèi)液體逐漸增加（畫面要有液體為稍粘稠的感覺），說明框內(nèi)顯示“注意避免氣泡”，3秒鐘后說明框隱去，液體倒完，鼠標(biāo)變?yōu)樵螤?，三角燒瓶回到原位置?膠板內(nèi)的瓊脂糖膠在室溫逐漸凝固成半透明的乳白色的固體（約3秒鐘），點(diǎn)擊點(diǎn)樣梳，點(diǎn)樣梳回到原位，畫面顯示膠板內(nèi)的瓊脂糖為乳白色半透明的固體，一端可見點(diǎn)樣孔。
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊并拖動電泳槽至操作臺中央，將膠板小心放入電泳槽內(nèi)。
5、 準(zhǔn)備電泳槽 ----- 1點(diǎn)擊電泳槽，并拖動電泳槽至操作臺中央，其內(nèi)可見無色透明液體（說明框顯示：1*TAE電泳緩沖液）；2 點(diǎn)擊膠板，鼠標(biāo)變?yōu)槭值男螤?，把膠板將其放入電泳槽內(nèi)（實(shí)驗(yàn)注意顯示：點(diǎn)樣孔一端置電泳槽的陰極）。
實(shí)驗(yàn)提示：使用微量吸液器，吸取5ul總RNA，點(diǎn)于塑料薄膜上.
6、吸取樣品 ---- 1點(diǎn)擊含有RNA的EP管，并拖動至操作臺中央，EP管蓋子打開；2點(diǎn)擊塑料薄膜，拖動至操作臺中央；3點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取5ul總RNA液體”，3秒鐘后隱去）；4點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；5拖動微量吸液器至EP管處，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)EP管內(nèi)含有總RNA的液體吸入槍頭內(nèi)的畫面）；6拖動微量吸液器至塑料薄膜處，點(diǎn)擊微量吸液器，吸液器內(nèi)液體滴入到塑料薄膜上（液體為一個小水滴狀）；7EP管蓋子自動蓋上，微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到移液架上。
實(shí)驗(yàn)提示：使用微量吸液器吸取6×上樣緩沖液（Loading buffer）1ul，滴入塑料薄膜上的總RNA液滴中，反復(fù)吸取幾次，混勻，避免氣泡出。
7、吸取上樣緩沖液---- 1點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取1ul液體”，3秒鐘后隱去）；2點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3拖動微量吸液器至上樣緩沖液處（藍(lán)色），點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)EP管內(nèi)液體吸入槍頭內(nèi)的畫面）；4拖動微量吸液器至塑料薄膜處，點(diǎn)擊微量吸液器，吸液器內(nèi)液體被打到塑料薄膜上的總RNA的液滴內(nèi)（液體為一個小水滴狀），反復(fù)吸取液體幾次，混勻，液體變?yōu)榫鶆虻{(lán)色；5微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊電泳槽，將塑料薄膜上的液體加入到電泳槽上的凹槽內(nèi)。
8、上樣 ---- 1點(diǎn)擊電泳槽，并拖動至操作臺中央（電泳槽內(nèi)靠近陰極側(cè)可見一排點(diǎn)樣孔）；2點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），槍頭加入到微量吸液器上；3拖動微量吸液器至塑料薄膜處，點(diǎn)擊塑料薄膜上的液體（出現(xiàn)塑料薄膜上液體吸入槍頭的畫面）；4拖動微量吸液器至凝膠板上的點(diǎn)樣孔處，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)液體注入凝膠孔內(nèi)的畫面，液體為淡藍(lán)色的液體）。
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊電泳儀，連接正負(fù)極，開始電泳。
9、電泳 ----- 1點(diǎn)擊電泳儀，電泳儀移動至操作臺中央；2點(diǎn)擊電泳槽上的“陰極”顯示扭，鏈接到電泳儀的“陰極”（出現(xiàn)黑色導(dǎo)線鏈接兩端的畫面），點(diǎn)擊電泳槽“陽極”顯示扭，鏈接到電泳儀的“陽極”（出現(xiàn)紅色導(dǎo)線鏈接兩端的畫面）；2持續(xù)點(diǎn)擊電泳儀上“電壓選擇”按鈕，電泳儀顯示屏上電壓從“50V”快速升高到“100v”；持續(xù)點(diǎn)擊電泳儀上“時間選擇”按鈕，電泳儀顯示屏上時間從“10min”快速升高到“30min”；點(diǎn)擊電泳儀上“開始”按鈕，說明框顯示“開始電泳”，畫面顯示電泳儀陰極不斷出現(xiàn)很多微小氣泡，藍(lán)色液體逐漸向陽極移動（畫面持續(xù)5秒鐘）；3說明框顯示“30分鐘后”，藍(lán)色液體移動至瓊脂糖凝膠的中間。
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊紫外分析儀，觀察結(jié)果。
10、觀察結(jié)果---- 1點(diǎn)擊紫外分析儀，紫外分析儀自動移動至操作臺中央；2點(diǎn)擊電泳槽，拖動瓊脂糖凝膠至紫外分析儀中的平板上。電泳儀、電泳槽回到原位；3點(diǎn)擊紫外分析儀，觀察結(jié)果，畫面顯示“三條帶”，說明框顯示“28s ，18s，5sRNA”。
實(shí)驗(yàn)提示：準(zhǔn)備分光光度計(jì)分析RNA純度，點(diǎn)擊EP管，稀釋RNA。
11、準(zhǔn)備EP管----點(diǎn)擊新的EP管，并拖動至工作臺中央的冰盒內(nèi)（EP管外顯示刻度0.5ml，1.0ml，鼠標(biāo)置于EP管上，說明框內(nèi)顯示“1.5mlEP管”，3秒鐘后隱去）。
實(shí)驗(yàn)提示：加入DEPC水98ul
12、加入DEPC水98ul---- 1 點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取98ul液體”，3秒鐘后隱去）；2 點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“100ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點(diǎn)擊微量吸液器，拖動DEPC水處，點(diǎn)擊DEPC水（槍頭內(nèi)顯示吸取98ul白色液體）；4拖動微量吸液器至EP管處，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)槍頭內(nèi)液體注入EP管內(nèi)的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器回到原位置。
實(shí)驗(yàn)提示：加入RNA2ul
13、加入RNA2ul ---- 1 點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取2ul液體”，3秒鐘后隱去）；2 點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點(diǎn)擊微量吸液器，拖動RNA處，點(diǎn)擊RNA水（槍頭內(nèi)顯示吸取2ul白色液體）；4拖動微量吸液器至EP管處，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)槍頭內(nèi)液體注入EP管內(nèi)的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器回到原位置。
實(shí)驗(yàn)提示：將稀釋的RNA加入比色皿中
14、將稀釋的RNA加入比色皿中----①點(diǎn)擊比色皿，并拖動至工作臺中央的冰盒內(nèi)，② 點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取100ul液體”，3秒鐘后隱去）；③ 點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“100ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；④點(diǎn)擊微量吸液器，拖動稀釋的RNA處，點(diǎn)擊稀釋的RNA水處（槍頭內(nèi)顯示吸取100ul白色液體）；⑤拖動微量吸液器至EP管處，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)槍頭內(nèi)液體注入EP管內(nèi)的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器回到原位置。
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊分光光度計(jì)，分析RNA純度
15、點(diǎn)擊分光光度計(jì)，分析RNA純度----1點(diǎn)擊分光光度計(jì)，拖動分光光度計(jì)自動移動至操作臺中央，分光光度計(jì)蓋子自動打開；2將比色皿加入分光度計(jì)內(nèi)，分光光度計(jì)蓋子自動合上；3點(diǎn)擊“開始分析”，觀察結(jié)果，畫面顯示“A260/A280=2.0”。
實(shí)驗(yàn)注意：通過電泳的結(jié)果觀察分析提取的總RNA有無降解：完整的RNA的電泳可明顯觀察到28s和18s兩條帶，并且28s大約是18s的兩倍寬。若兩條帶不明顯，則說明RNA部分降解。
RNA的純度確定：A260/A280≈2.0，如果A260/A230<2，除鹽不充分。
計(jì)算RNA的濃度：RNA原液的濃度=（A260-A230）*稀釋倍數(shù)*40（ng/ul）
【逆轉(zhuǎn)錄】
【出現(xiàn)工作臺界面】
【左側(cè)】：PCR儀、盛有冰的容器（不帶蓋）、微量取液器、盛有消毒槍頭的塑料盒、EP管
【右側(cè)】：總RNA、MgCl2(25mM)（無色液體，水滴狀表示）、Reverse transcription 10*Buffer（白色透明波浪狀液體）、dNTP Mixture(10mM)（A、T、G、C）、RNase Inhibitor（白色球狀液體）、Random 9 mers（單鏈RNA狀）、Reverse Transcriptase（ 狀）、DEPC水（水滴狀）
【畫面中央】：工作臺：一塊象征性的平臺，有“工作臺”字樣
【界面按鈕設(shè)計(jì)】：實(shí)驗(yàn)注意：有內(nèi)容時自動顯示
實(shí)驗(yàn)提示：步箭頭放上自動顯示，以后每一步均自動顯示
重新操作：返回到上一步結(jié)束
退出實(shí)驗(yàn)：回到本步驟界面
退出運(yùn)行：回到首頁
關(guān)閉音樂：實(shí)驗(yàn)開始，背景音樂自動響起。按此鍵，即關(guān)閉音樂
【操作開始】
實(shí)驗(yàn)提示：將2ul總RNA加入EP管，點(diǎn)擊PCR儀，70℃孵育10分鐘。
1、 孵育 ---- 1點(diǎn)擊EP管， EP管蓋子自動打開，EP管自動移動至桌面中央；2點(diǎn)擊微量吸液器（說明框顯示“吸取2ul液體”，3秒鐘后隱去）；3點(diǎn)擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），槍頭自動加入到微量吸液器上（槍頭為黃色）；4點(diǎn)擊微量吸液器，拖動至總RNA處，點(diǎn)擊總RNA（槍頭內(nèi)顯示吸取2ul無色透明液體）；5拖動微量吸液器至EP管處，點(diǎn)擊微量吸液器（出現(xiàn)槍頭內(nèi)液體注入EP管內(nèi)的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器回到移液架上，槍頭自動至垃圾桶內(nèi);6點(diǎn)擊PCR儀，并拖動至操作臺中央，PCR儀蓋子自動打開;7拖動EP管放入PCR儀內(nèi),PCR儀蓋子自動蓋上（說明框顯示：孵育：______℃,時間:-_______分鐘;實(shí)驗(yàn)提示:孵育70℃,10分鐘,若填錯,實(shí)驗(yàn)不能繼續(xù)）；8說明框顯示:“10分鐘后”，3秒鐘后隱去,PCR儀蓋子自動打開,EP管位于桌面上的冰盒內(nèi),PCR儀蓋子關(guān)上,PCR儀回到原位。
實(shí)驗(yàn)注意：去除RNA二級結(jié)構(gòu)。
實(shí)驗(yàn)提示：將EP管立即拖動至盛有冰的容器內(nèi)。
2、配制反應(yīng)液----- 1點(diǎn)擊MgCl2(25mM)，說明框顯示：加入______ul，實(shí)驗(yàn)提示：4ul，若填錯,實(shí)驗(yàn)不能繼續(xù)；填寫正確后，MgCl2(25mM)自動加入EP管內(nèi)，EP管內(nèi)液面上升；2點(diǎn)擊Reverse transcription 10*Buffer，說明框顯示：加入______ul，實(shí)驗(yàn)提示：2ul，若填錯,實(shí)驗(yàn)不能繼續(xù)；填寫正確后Reverse transcription 10*Buffer自動加入EP管內(nèi)，EP管內(nèi)液面上升；3同上依次加入dNTP Mixture(10mM) 2ul、RNase Inhibitor 0.5ul、Random 9 mers 1ul、Reverse Transcriptase 1ul、DEPC水 7.5ul；4加入完成后，EP管蓋子自動蓋上，自動混勻。
實(shí)驗(yàn)注意：以上液體加入不分先后順序，均需使用微量吸液器。
實(shí)驗(yàn)提示：點(diǎn)擊PCR儀，進(jìn)行cDNA反應(yīng)。
3、逆轉(zhuǎn)錄----- 1點(diǎn)擊PCR儀， PCR儀自動移動至操作臺中央，蓋子自動打開;2拖動EP管放入PCR儀內(nèi),PCR儀蓋子自動蓋上，冰盒回到原位（說明框顯示：30℃，_______分鐘；42℃，_______分鐘；95℃，_______分鐘；5℃，_______分鐘。實(shí)驗(yàn)提示顯示：10分鐘，15分鐘，5分鐘，5分鐘）。3填寫完畢后，說明框提示：開始運(yùn)行，5秒鐘后隱去，PCR儀蓋子打開，EP管位于操作臺中央，PCR儀回到原位。
實(shí)驗(yàn)提示：cDNA制備完成。
各種溫度設(shè)置的作用
【RT-PCR擴(kuò)增hTNF-α基因】
【出現(xiàn)工作臺界面】
【左側(cè)】：PCR儀、振蕩器、微量取液器、盛有消毒槍頭的塑料盒、EP管
【右側(cè)】：cDNA模板（DNA雙鏈結(jié)構(gòu)樣表示）、MgCl2(25mM) （無色液體，水滴狀表示）、10*Buffer（白色透明波浪狀液體）、dNTP Mixture(10mM)（AGTC）、Taq酶（ 樣，鼠標(biāo)放上實(shí)驗(yàn)注意：-20℃保存，切勿反復(fù)凍融）、Forward引物（白色透明水滴狀液體）、Reverse 引物（白色透明水滴狀液體）、DEPC水（無色水滴狀液體）
【畫面中央】：工作臺：一塊象征性的平臺，有“工作臺”字樣
【畫面右下角】：垃圾桶（有骷髏頭圖形標(biāo)記）
【界面按鈕設(shè)計(jì)】：實(shí)驗(yàn)注意：有內(nèi)容時自動顯示
實(shí)驗(yàn)提示：步箭頭放上自動顯示，以后每一步均自動顯示
重新操作：返回到上一步結(jié)束
退出實(shí)驗(yàn)：回到本步驟界面
退出運(yùn)行：回到首頁
關(guān)閉音樂：實(shí)驗(yàn)開始，背景音樂自動響起。按此鍵，即關(guān)閉音樂
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